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基礎信息Product information
產品名稱:

肺炎支原體核酸檢測試劑盒說明書

產品簡介:

肺炎支原體核酸檢測試劑盒說明書保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品型號:50T

廠商性質:經銷商

訪問量:470

更新時間:2021-06-11

產品特性Product characteristics

服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。

產品名稱

規格

貨號

肺炎支原體核酸檢測試劑盒說明書

50T

HE60654-R


實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰-beta-D-氨基半乳糖苷 X-Galactosamidide 129572-48-1 質量規格:分子生物學級  石蠟切片DNA高質純化試劑盒 進口/國產 規格:20次

巖藻黃質;褐藻素 Fucoxanthin 3351-86-8 質量規格:BR,UV>30%  石蠟切片DNA分離+高質純化試劑盒 進口/國產 規格:100次

Brij 58 Brij 58 9004-95-9 質量規格:BR  石蠟切片組織線粒體DNA分離試劑盒 進口/國產 規格:50次

二硫代乙酰胺(>98%,BR) Dithiooxamide 79-40-3 質量規格:>98%,BR  口腔粘膜細胞基因組DNA純化試劑盒 進口/國產 規格:50次

脫氧核糖核酸酶 II DNase II, from Pocine Pancreas 9025-64-3 質量規格:分子生物學級  植物基因組DNA純化試劑盒(低多糖/酚) 進口/國產 規格:50次

高粘度纖維素 HEC, hydroxyethyl cellulose 9004-62-0 質量規格:38000~42000 mpa.s  植物基因組DNA純化試劑盒(高多糖/酚) 進口/國產 規格:50次

L-天冬氨酸鈉一水 L-Aspartic acid sodium salt, monohydrate 323194-76-9 質量規格:>99%,BR  土壤DNA分離試劑盒 進口/國產 規格:50次

鉛屑(>99%,5N) Lead granules 7439-92-1 質量規格:>99%,5N  土壤DNA高質純化試劑盒 進口/國產 規格:20次

粘蛋白 Mucin from bovine submaxillary glands 84195-52-8 質量規格:Type I-S; from bovine submaxillary glands  土壤DNA分離+高質純化試劑盒 進口/國產 規格:20/50次

N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯(>98%,EP) N,N'-Disuccinimidyl carbonate (DSC) 74124-79-1 質量規格:>98%,EP  土壤細菌DNA分離試劑盒 進口/國產 規格:50次

氟化鎳四水(>98%,BR) Nickel (II) fluoride tetrahydrate 10028-18-9 質量規格:>98%,BR  土壤細菌DNA分離+高質純化試劑盒 進口/國產 規格:20/50次

二氧化硅(>99.9%,BR) Silicon (IV) oxide 14808-60-7 質量規格:>99.9%,BR  冰凍切片DNA分離試劑盒 進口/國產 規格:50次

氟化鍶(>97%,BR) Strontium fluoride 7783-48-4 質量規格:>97%,BR  動物細胞基因組DNA分離試劑盒 進口/國產 規格:20/50次

丁香醛(>98%,BP) Syringaldehyde 134-96-3 質量規格:>98%,BP  動物組織基因組DNA分離試劑盒 進口/國產 規格:50次

肺炎支原體核酸檢測試劑盒說明書大鼠轉狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒  α1-酸性糖蛋白(α1AGP)重組蛋白Recombinant Alpha-1-Acid Glycoprotein (a1AGP)

八聚體轉錄因子(OTF2A)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  α2-巨球蛋白(α2M)重組蛋白Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)

抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV IgM)ELISA試劑盒48T/96T試劑盒  α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)重組蛋白Recombinant Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI)

細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  α-胞襯蛋白(SPTAN1)重組蛋白Recombinant Alpha-Fodrin (SPTAN1)

小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  α-乳清蛋白(αLA)重組蛋白Recombinant Alpha-Lactalbumin (aLA)

小鼠新生狀腺素(NN-T4)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  α-血紅蛋白穩定蛋白(αHSP)重組蛋白Recombinant Alpha-Hemoglobin Stabilizing Protein (aHSP)

大鼠肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  β2-微球蛋白(β2M)重組蛋白Recombinant Beta-2-Microglobulin (b2M)

猴子層連蛋白/板層素(LN)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  β-位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(βACE1)重組蛋白Recombinant Beta-Site APP Cleaving Enzyme 1 (bACE1)

白血病抑制因子(LIF)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  β細胞素(βTC)重組蛋白Recombinant Betacellulin (bTC)

溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  δ-促睡眠肽(δSIP)重組蛋白Recombinant Delta-Sleep Inducing Peptide (dSIP)

抗糖蛋白抗體(GP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒  β-血小板球蛋白(βTG)重組蛋白Recombinant Beta-Thromboglobulin (bTG)

使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

8.公司產品僅用于科研。

 

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